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2020-06-26上海代怀孕中介 佚名

上海代孕套餐_上海代生男宝宝多少钱_张锋团队推出新一代 CRISPR 检测技术,或将用于新冠病毒家庭检测 “以具备治愈数千种遗传性疾病潜力而闻名的‘革命性技术’CRISPR,也可以解决 Covid-19 诊断测试所面临的挑战。” 5 月 5 日,Broad 研究所的著名学者张锋教授和他在 Broad 研究所、麻省理工学院(MIT)麦戈文脑科学研究所(McGovern Institute for Brain 上海代孕套餐_上海代生男宝宝多少钱

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Research)的合作伙伴一起,公布了他们开发的新一代新冠病毒 CRISPR 检测技术的实验流程。 (来源:McGovern Institute for Brain Research) 该检测过程中不需要从患者样本中纯化 RNA,并且将检测新冠病毒所需的化学反应步骤在一个试管中完成。在检验 12 个新冠病毒阳性和 5 个新冠病毒阴性样本的实验中,这一检测达到 100% 的特异性和 97% 的灵敏度。 更高效:无需纯化病毒 RNA,检测过程仅在一个试管内完成 由新型冠状病毒 SARS-CoV-2 导致的 COVD-19 可以使用 RT-qPCR(实时荧光定量 PRC)进行诊断,在 RT-qPCR 实验中,RNA 提取完成后需要对 RNA 的质量进行评估,合格后才可进行后续实验,虽然操作流程简单,经济高效,需要的 RNA 加样量少,但也存在易污染的问题,极其微量的污染即可导致假阳性。新冠疫情爆发期间,RT-qPCR 检测试剂和设备的不足大大减慢了疾病检测的进度。 今年 2 月张锋团队曾发表论文,基于等温扩增和 CRISPR 介导检测相结合的替代方法(SHERLOCK:Specific High Sensitivity Enzymatic Reporter UnLOCKing),对新冠病毒进行检测。 SHERLOCK 技术的核心是一种叫做 Cas13a 的蛋白酶和与其结合的向导 RNA。根据新冠病毒的 RNA 序列,研究人员设计了能够靶向新冠病毒特异性序列的向导 RNA,只要 样本里有新冠病毒所对应的 RNA,向导 RNA 就能对其进行精准的识别,并激活与其结合的 Cas13a 蛋白酶,被激活的 Cas13a 蛋白酶可以切开所遇到的任何 RNA 分子。同时,研究人员们在样本里还会添加一种通过 RNA 相连接的特殊分子,伴随着 Cas13a 的激活,这种特殊分子上的 RNA 就会被切断,通过确认这些分子是否被切断,就能知道最初的样本里有没有新冠病毒上海

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的存在。 该技术减少了对 RT-qPCR 设备的依赖,但先前报道的方法仍需要多个前处理步骤,而且样本通常要运送到中央实验室中进行检测,可能延误对患者的诊断和治疗时间,更多的样本转移步骤可能带来的污染使其检测部署更加复杂。 因此,研发团队本次开发一种更为简便的检测手段,让扩增 RNA 数目的等温扩增步骤和 Cas 酶检测的化学反应能够在同一个试管中进行。为此,他们选择了环介导等温扩增技术(Loop-mediated Isothermal Amplification, LAMP)作为扩增 RNA 的方法,LAMP 所需的试剂并不难于获取,具备较高的实用性。 LAMP 反应需要在温度为 60℃的反应条件下进行,而 Cas13a 在这一温度下不够稳定。针对这一问题,研究人员找到了名为 AapCas12b 的 Cas 酶,能够在 LAMP 反应条件下维持足够的活性,同时对指导 RNA 和反应中的添加剂进行了优化,让 Cas 酶介导的检测步骤维持足够的灵敏度。在实验条件下,这一检测的下限为 100 个新冠病毒 RNA 分子。 图丨 STOPCovid 检测的测试流程(来源:上述论文) 张锋团队将其命名为“STOP”(SHERLOCK Testing in One Pot),可在一小时内检测 SARS-CoV-2,该测试(STOPCovid)具备与 RT-qPCR 水平相当的灵敏度,同时简化了提取 RNA 的步骤,只需要在含有新冠病毒的咽拭子或唾液样本中加入裂解病毒、释放 RNA 的试剂,无需纯化分离 RNA,就可以将释放的病毒 RNA 用于检测,整个过程仅在一个试管内即可完成。 “STOPCovid 甚至可能在家里或工作场所使用,与怀孕检测试纸无异,它的价格便宜,不需要特定的实验室,并且可以在一小时内得到结果。可广泛应用、准确、价格低廉等特点将有助于解决现在对 COVD-19 检测的迫切需求。”张锋对海外媒体 STAT 表示。 更准确:STOPCovid 上海代孕套餐_上海代生男宝宝多少钱 在检测患者样本时表现出 100% 特异性 目前,新冠肺炎的实验室检测主要从两方面进行:一是病原学检测,即新冠病毒核酸检测;另一个是血清学检测,即新冠病毒特异性 IgM 抗体检测。 通常所说的唾液采样和鼻咽拭子采样都是基于 RT-qPCR 进行新冠病毒核酸检测。唾液检测的优点在于采样方便,能减少医务人员的感染风险,提高患者接受度。唾液中的病毒含量会随着疾病的发展而发生变化,与鼻咽拭子相同,唾液检测的质量也受样本采集因素影响。 除张锋团队外,已许多研究团队从唾液 / 鼻咽或口咽拭子中提取 RNA,体外扩增后用 CRISPR 检测预定义的冠状病毒序列,以此替代唾液 / 鼻咽或口咽拭子 RT-qPCR 检测,其技术原理与 SHERLOCK 技术并无本质差异,也存在相似的污染导致的假阳性问题。 例如,就在上个月,加利福尼亚大学旧金山分校和 Mammoth Biosciences 的科学家公布了 CRISPR 工具,其检测时间大约需要 40 分钟,远快于 RT-qPCR。但这些技术虽具备速度快的优势,但其假阳性较 RT-qPCR 检测更高。 产生此现象最主要的原因是 CRISPR 检测新冠病毒需要两个步骤:1)使用等温扩增(isothermal amplification)反应扩增 RNA 的数量;2)将扩增的样本加入到包含 Cas 酶和其它反应试剂的试管中进行检测反应。这不但增加了检测流程的复杂性,而且更多的样本转移步骤让交叉污染的可能性增大。 此次发布的 “STOPCovid” 的关键进展是将上述 “两步走” 过程简化为一步反应,进而防治了样本转移过程中的交叉污染,让检测结果更准确。“这使 STOPCovid 适合在新冠病毒快速检测站即时使用。”张锋说。 本次试验,研究人员使用 12 个新冠病毒阳性和 5 个新冠病毒阴性患者咽拭子样本对 STOPCovid 检测的特异性和灵敏度进行了检验。每个样本都进行了三重测试(triplicate)。实验结果表明,上海代孕套餐_上海代生男宝宝多少钱在 5 个新冠病毒阴性的样本中,STOPCovid 没有给出任何假阳性结果,而在 12 个新冠病毒阳性样本中,STOPCovid 在 11 个样本的三次测试中都给出阳性结果,在 1 个样本的三次测试中两次给出阳性结果。 图丨STOPCovid 检测结果(来源:上述论文) 目前,研究团队已经与美国 FDA 进行交流,探索获得紧急使用授权( EUA)所需要的步骤。同时,科学家们已经准备了可进行 10000 次测试的工具,以便供想要评估其潜在诊断用途的研究人员自由使用。
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